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光镜下观察到的细胞骨架有何形态特征
发表日期:2019/7/25       点击:168
洋葱表皮细胞骨架的考染结果
洋葱鱗茎外层与内层的表皮细胞比较(放大倍数10X20),a:鳞茎外层(对照);b:鳞茎内层
四、思考题
1. 光镜下观察到的细胞骨架有何形态特征?
2. 请设计一个实验鉴定你所观察到的细胞骨架是哪一类型。
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第十章细胞生理生化
实验44细胞凋亡小体和梯状DNA的诱导和观察
细胞死亡作为生物体的一种常见现象,一般可分为两种类型:细胞坏死 (necrosis)和细胞程序性死亡(programmed cell death, PCD)。后者也称细胞凋 亡(apoptosis)。细胞坏死是细胞在遭受极度刺激时引起的细胞死亡,以细胞质 膜的破裂为特征,造成内含物的炎性泄露,是一种非正常死亡。细胞凋亡是细胞 的一种“主动性”死亡行为,由基因控制,表现为细胞染色质凝集并边缘化、细
胞浓缩、凋亡小体产生及DNA片段化等。由于片段化而形成的DNA Ladder被 认为是细胞凋亡的典型特征。
细胞程序性死亡被分为两类:受体介导的细胞程序性死亡和线粒体介导的细 胞程序性死亡。本实验主要涉及到线粒体介导的凋亡途径。线粒体可以进行氧化 磷酸化并产生ATP,同时它还可以诱导使PCD发生的物质-细胞色素c (cytc)的 泄漏。线粒体膜上存在Bax组成的孔道。Bcl-2等抑制它的开放,从而抑制PCD 因子的释放和阻止PCD的发生。而Bad等促进Bax开放,从而导致Apaf (apoptosis protease activating factor 调亡蛋 白活化.因子 ) 活化,使 cyt c 释放,致使 cyt c、Apa£-1、caspasW (半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶,简称Caspase)复合物的形成, 使得细胞处于细胞凋亡的执行阶段(见图10-7)。凋亡的标准特征之一,是基因 组DNA断裂为180~ 200bp的多条寡核苷酸小体片段。此现象可用常规琼脂糖 凝胶电泳检测,是凋亡的特征。DNA梯状序列最后可在紫外灯下显示,人们可 以照像记录它的电泳行为。根据DNA的电泳行为,人们就可以判断出细胞死亡 的类型。凋亡细胞形成明显的梯状DNA,坏死细胞则为不清晰弥散状DNA,而 活细胞DNA在琼脂糖凝胶的顶部,是一个没有受到切割的高分子量条带。
cytc是电子传递链的重要组成部分,定位于线粒体内,是真核细胞内不可 缺少的重要因子。但当它溢出线粒体后就会诱导细胞凋亡。在本实验中,向洋葱 内表皮、烟草悬浮细胞或人口腔内皮细胞等加入cyt c或其他凋亡诱导物如髙盐, 观察诱发产生的凋亡细胞。用改良苯酚品红染色观察凋亡细胞核发生染色质凝集 (condensation)、趋边化(margination)、DNA 裂解(fragmentation)产生凋亡小 体等形态学上的变化,用琼脂糖凝胶DNA电泳检测细胞凋亡后形成的DNA Ladder。
材料,试剂和仪器
1?材料烟草悬浮细胞株系、洋葱内表皮及人口腔内皮细胞
2.试剂的配制
(1)烟草悬浮细胞的基本培养基(见附录5)
实验44细胞凋亡小体和梯状DNA的诱导和观察
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