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细胞骨架是指细胞质中纵横交错的纤维网络结构
发表日期:2019/7/25       点击:142
洋葱内表皮Unna染色的结果 DNA被甲基绿染成绿色,RNA被哌洛宁染成红色
实验42核酸(DNA和RNA)的细胞核定位观察
四、思考题
1. 参考图10-5简述DNA和RNA的亚细胞定位?
2. 解释设立对照组的必要性是什么?三氯乙酸和丙酮各起什么作用。
3. 欲得到一张好的Feulgen反应制片,在制作过程中应注意些什么
4. 绘一简图,显示Feulgen反应及Unna染色法制作的标本。在细胞质及细胞核 内的染色结果上有何区别。这种染色差异说明什么?
第十章细胞生理生化
实验43细胞骨架的光学显微镜观察
细胞骨架是指细胞质中纵横交错的纤维网络结构,按组成成分和形态结构的 不同可分为微管、微丝和中间纤维。它们对细胞形态的维持、细胞的生长、运 动、分裂、分化和物质运输等起重要作用。光学显微镜下细胞骨架的形态学观察 多用1% Triton X-100处理细胞,可使细胞膜溶解,而细胞骨架系统的蛋白质被 保存,再用考马斯亮蓝R250染色,使得胞质中细胞骨架得以清晰显现。
一、材料、试剂和仪器
1. 材料新鲜洋葱鱗茎、人口腔上皮细胞
2. 试荆
(1) M缓冲液(pH 7.2)各成分终浓度为:
50mmolA 咪唑(MW: 68.08),50mmol/lKCl (MW: 74.55),0.5mmol/l MgCl2-6H20 (MW: 203.30), lmmol/1 EDTA (MW: 380.36), 0.1mmol/l EDTA-Na2 (MW: 372.24), lmmol/1 DTT (MW: 154.3)
(2) 6mmol/lPBS磷酸缓冲液(pH6.5):
KH2P04:Na2HPCV2H20 = 7:3 (见附录3査磷酸缓冲液的配置)
(3) 0.7% NaCl生理盐水
(4) 1% TritonX-100 (聚乙二醇辛基苯基醚)溶于M缓冲液
(5) 3% 戊二醛 100ml:25% 戊二醛取 12ml,PBS 88ml
(6) 0.2%考马斯亮蓝R250染液200ml:考马斯亮蓝R250 0.2g,甲醇 46.5ml,冰乙酸7ml,蒸镏水46.5 ml
3?仪器光学显微镜、镊子、剪刀、试管、表面皿、滴管、载玻片、盖玻片、 灭菌牙签、1.5ml离心管、lml枪头、lml取液器、酒精灯、染色缸
二'实验程序
撕取洋葱近中轴鱗片内表皮 0.5~lcm2和靠近外层鱗片内表皮 0.5 ~ lcm2作对照
加 1% TritonX-100,室温 120min
用干净牙签刮取人口腔上皮细胞,置于 1.5ml离心管中,力U lml生理盐水,混匀后 3000rpm离心lOmin,剩0.5ml上清液,用 吸管吹打均匀、涂片、晾干
M缓冲液漂洗3次
l%Triton X-100 371C 处理 30min
实验43细胞骨架的光学显微镜观察 ? 225 ?
吸去Triton X-100,M -缓冲 M缓冲液漂洗3次
液洗三次,每次3min |
i 3%戊二醛固定15?20min
3%戊二醛固定20min |
i 磷酸缓冲液洗3次,滤纸吸干
磷酸缓冲液洗三次,每次lOmin |
I 0.2%考马斯亮蓝染色5min
0.2%考马斯亮蓝染色20~30min |
I 水洗制成临时片
蒸馏水洗1~2次 j
1 镜检
压片镜检
三、结果与分析
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